DOI: 10.2116/analsci.20scp10
种种细胞和构造在体内由基底膜 (BMs) 高度构造，是以通过静电纺丝和层层 (LbL) 自组装构建的人工 BMs (A-BMs) 近来在构造工程范畴引起了遍及存眷。然而，对 A-BM 上附着细胞的细胞粘附、形态和迁徙的操纵尚未见报道。在这项研究中，作者研究了 A-BMs 的厚度和粗糙度对内皮细胞 (ECs) 功效的影响，这是由差别的组装浓度引起的。效果评释，随着纳米薄膜厚度的增添，A-BMs的粗糙度渐渐增添。EC 粘附、扩散和增殖在具有较大粗糙度的较厚 A-BM 外貌上受到按捺，而内皮间毗连和融合 EC 单层在较厚 A-BM 外貌上的屏蔽作用通过增添接种细胞数目和延伸造就时间来赔偿。研究夸大了 LbL 组装条件对内皮功效的影响，这为在构造精良的 3D 构造中设计 A-BM 提供了新尺度。
图 1 在 QCM 芯片上形成 Col-IV/LM 多层纳米膜。(a) 在 37°C 下，利用 QCM 在 50 mM Tris-HCl 缓冲溶液 (pH = 7.4) 中丈量 5 个双层的 Col-IV (○) 和 LM (●) 组装的频移和厚度增添。组装组件的浓度，即 Col-IV 和 LM，操纵在4–1000 μg/mL 的范畴内。n = 3. (b) 由差别浓度的 Col-IV 和 LM 溶液组装而成的 Col IV/LM 纳米膜的厚度，用于 5 个双层。
图2 (a) AFM 图像和(b) 从差别浓度的种种组装溶液中得到的(Col-IV/LM)5 纳米膜的彩色3D 激光扫描显微镜图像。由聚苯乙烯 (TC-PS) 构成的构造造就处置惩罚板作为对比样品。(c) 彩色 3D 激光扫描显微镜丈量的每个纳米膜的粗糙度漫衍 (Ra) 的算术均匀值。
图 3 内皮细胞粘附在 (Col-IV/LM)5 纳米膜上。在 TC-PS 底物上造就的 HUVECs 作为对比样品。细胞接种密度为 1.0 ×104 个细胞/cm2。(a) 造就 2 小时和 2 天后，HUVEC 的形态附着在差别厚度的 (Col-IV/LM)5 纳米膜上。比例尺为 100 μm。(b) 粘附的 HUVEC 细胞密度和 (c) 在造就 2小时和 2天后在差别厚度的 (Col-IV/LM)5 纳米膜上造就的每个 HUVEC 的扩散面积。n = 3. 绘制 (d) 2 h 和 (e) 2 天造就后的 HUVECs 形态纵横比漫衍，在 TC-PS 基质上造就的 HUVECs 作为对比样品。
图 4 造就 1、3 和 7 天后，差别厚度的 (Col-IV/LM)5 纳米膜上 HUVECs（3.0 × 104 个细胞/cm2）的增殖情形。细胞数被尺度化为第 1 天粘附到 TCPS 的细胞百分比。
图5 造就5天后融合的HUVEC细胞间毗连卵白和细胞形态的表征。(a) 差别厚度的 (Col-IV/LM)5 纳米膜上融合的 HUVEC 的免疫荧光图像。细胞被标志为 CD31 和 VE-钙粘卵白以表现粘附毗连卵白的位置，以及 ZO-1、密卵白 5 以表现精密毗连卵白的位置。细胞核用 Hoechst 33342 染色并表现为蓝色。在裸露的 24 孔插入物上造就的 HUVECs 单层作为对比样品。比例尺为 50 μm。通太过析图 5a 中的免疫荧光强度，定量阐发（b）每个细胞的细胞间毗连笼罩面积和（c）融合 HUVECs 单层的笼罩面积百分比。n = 4。
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